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多肽物质分子量检测技术

编辑:浙江威乐多肽合成有限公司   时间:2014/06/26   字号:
摘要:多肽物质分子量检测技术

随着分子生物学和生物技术的飞速发展,具有高生物活性的多肽类化合物的分离、纯化和分析已显得尤为突出。许多分离、纯化和分析技术都是以分子量的大小为手段的,现将我们采用的几种主要的技术介绍如下:

凝胶过滤测相对分子量

该技术即凝胶过滤层析,也称分子排阻层析或凝胶渗透。利用凝胶过滤可以把蛋白质多肽类混合物按分子量的大小分离出来。当不同分子大小的蛋白质多肽类混合物流经凝胶层析柱时,由于不同大小的分子所经路径不同而得到分离,大分子先被洗脱出来,小分子后被洗脱出来。

该方法简单,不要求复杂的仪器就可较准确地测出蛋白质多肽的相对分子量。另外,利用该技术测Mr(相对分子量)还有一个优点,即待测物可以不纯。

该技术一般采用交联葡聚糖为基质,其商业名称为Sephadex。根据需要可选用SephadexG-25(分级分离的Mr范围5000以下)、SephadexG-75(Mr范围3000~80000)、SephadexG-100(Mr范围4000~150000)。实验时,以蛋白质标准的分子量对数值为纵坐标、洗脱体积为横坐标作标准曲线。根据待测品的洗脱体积从标准曲线上查出它的Mr。

SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测相对分子量

在聚丙烯酰胺凝胶电泳系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠(SDS)和少量巯基乙醇,蛋白质多肽类混合物的电泳迁移率将主要取决于它们的相对分子量,而与电荷和形状无关。

目前,对于小分子多肽的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳,选择合适的系统及合适的分离胶、浓缩胶甚至是间隙胶的浓度和交联度一直是人们研究的热点。另外,应选择合适的蛋白质标准分子量范围,使得待测品的分子量能落在此范围内。

实验测定时,以各种标准蛋白质的Mr的对数值为纵坐标,其μR(相对迁移率)为横坐标作标准曲线。根据待测品的μR从标准曲线上查出它们的Mr。

高效凝胶排阻色谱(HPSEC)技术测相对分子量

HPSEC是一种基于分子筛原理与高速流动的流动相的层析分离方法,该技术快速、灵敏、高效,对于实验结果的处理与凝胶过滤一样。

固定相的孔径大小及流动相速度直接影响分离效果。固定相原材料主要有Sw和Pw两种,但一般情况下,仍首先考虑采用Sw型。主要规格有TSK-2000Sw(适合于5000~100000的蛋白多肽)、TSK-4000Sw(适合50000~1000000)等。流动相一般为缓冲液(常用磷酸或醋酸缓冲液),也可含有机溶剂(甲醇或乙腈)和变性剂(尿素、胍、SDS)。

以上简要介绍了多肽类分子量测定的几种常用技术。随着科学技术水平的不断发展,会有许多更新的技术不断涌现,因此这一领域的研究具有广阔的前景。

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